Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
Показано, что следующие питательные среды являются подходящими для испытания на стерильность. Жидкая тиогликолевая среда предназначена в первую очередь для культивирования анаэробных бактерий, но также обнаруживает и аэробные бактерии. Среда на основе гидролизатов соевых бобов и казеина # и среда Сабуро подходит для культивирования как грибов, так и аэробных бактерий.
Могут быть использованы также и другие среды, при условии их соответствия требованиям испытаний на пригодность.
Жидкая тиогликолевая среда.
L-цистин 0,5 г
Гранулированный агар (избыточное содержание вла 0,75 г
ги составляет не более 15%)
Натрия хлорид 2,5 г
Глюкозы моногидрат / Безводная глюкоза 5,5 / 5,0 г
Дрожжевой экстракт (водорастворимый) 5,0 г
Панкреатический гидролизат казеина 15,0 г
Натрия тиогликолят или 0,5 г
Тиогликолевая кислота 0,3 мл
Раствор резазурина натриевой соли (1 г/л) свежепри 1,0 мл
готовленный
Вода 1000 мл
рН среды после стерилизации 7,1 ±0,2
Смешивают L-цистин, агар, натрия хлорид, глюкозу, водорастворимый дрожжевой экстракт и панкреатический гидролизат казеина с 1000 мл воды и нагревают до получения раствора. Натрия тиогликолят или тиогликолевую кислоту растворяют в полученной смеси и, при необходимости, добавляют 1 М раствор гидроксида натрия так, чтобы после стерилизации значение рН раствора составляло 7,1 ±0,2. Если необходима фильтрация, раствор снова нагревают, не доводя до кипения, и фильтруют в горячем виде через увлажненную фильтровальную бумагу. Добавляют раствор резазурина натриевой соли, перемешивают и помещают среду в подходящие сосуды, которые обеспечивают такое отношение поверхности к глубине среды, чтобы изменению окраски, указывающему на поглощение кислорода в конце периода инкубирования, был подвержен только верхний слой, составляющий не более трети от общего объема среды. Стерилизуют с использованием процесса с подтвержденной эффективностью. Среду хранят при температуре 2-250С в стерильном герметичном контейнере. Если верхний слой, составляющий не более трети от общего объема среды, приобретает розовую окраску, среду можно однократно регенерировать путем нагрева контейнеров на водяной бане или в струе пара до исчезновения розовой окраски с последующим быстрым охлаждением; при этом должны быть приняты меры предосторожности против попадания в контейнер нестерильного воздуха. Среду не используют по истечении валидированных сроков хранения.
Жидкую тиогликолевую среду инкубируют при температуре 30-350С.
Среда на основе гидролизатов соевых бобов и казеина
Панкреатический гидролизат казеина 17,0 г
Папаиновый гидролизат сои 3,0 г
Натрия хлорид 5,0 г
Калия гидрофосфат 2,5 г
Глюкозы моногидрат / Безводная глюкоза 2,5 г / 2,3 г
Вода 1000 мл
рН среды после стерилизации 7,3±0,2
Твердые компоненты растворяют в воде, слегка нагревая для получения раствора. Раствор охлаждают до комнатной температуры. При необходимости добавляют 1 М раствор гидроксида натрия так, чтобы после стерилизации значение рН раствора составляло 7,3±0,2. При необходимости устранения мутности раствор фильтруют, разливают по подходящим сосудам и стерилизуют с использованием процесса с подтвержденной эффективностью. Если среда не подлежит немедленному использованию, ее хранят при температуре 2-250С в стерильном герметичном контейнере. Среду не используют по истечении валидированных сроков хранения.
Среду на основе гидролизатов соевых бобов и казеина инкубируют при температуре 20-250С.
# Допускается использование среды Сабуро.
Пептон ферментативный 10,0 г
Глюкоза 40,0 г
Вода до 1000 мл
рН после стерилизации 5,6 ± 0,2
Среду Сабуро инкубируют при температуре 20-250С.
Используемая среда должна выдерживать следующие испытания, проводимые для каждой партии до или одновременно с испытанием тестируемой продукции.
Стерильность. Порции среды инкубируют в течение 14 дней. Роста микроорганизмов наблюдаться не должно.
Питательные свойства в отношении аэробов, анаэробов и грибов.
Проверке подвергают каждую партию готовой среды, и каждую партию среды, приготовленной из обезвоженных составов или из ингредиентов. Подходящие штаммы микроорганизмов приведены в Таблице 2.6.1.-1.
Порции жидкой тиогликолевой среды засевают небольшим количеством (не более 100 колониеобразующих единиц) следующих микроорганизмов: Clostridium sporogenes, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus. Для каждого из штаммов используют отдельную порцию среды. Порции среды на основе гидролизатов соевых бобов и казеина (# или среды Сабуро) засевают небольшим количеством (не более 100 колониеобразующих единиц) следующих микроорганизмов: Aspergillus niger, Bacillus subtilis, Candida albicans. Для каждого из штаммов используют отдельную порцию среды. Инкубируют в течение не более 3 дней в случае бактерий и не более 5 дней в случае грибов.
